Лимфокар инструкция по применению

Представляет собой готовую к использованию среду, в состав которой входят все необходимые вещества для культивирования лимфоцитов цельной крови. Предназначена для культивирования лимфоцитов крови in vitro с целью получения делящихся клеток и последующего анализа метафазных хромосом.

Инструкция Лимфокар-2

Данный продукт имеет Регистрационное Удостоверение. 

Среда «Лимфокар-2» является вспомогательным средством в диагностике возможных патологических нарушений на генетическом уровне. Используется для диагностики in vitro (кариотипирования) — для культивирования лимфоцитов крови in vitro и последующего цитогенетического анализа метафазных хромосом с вычислением митотического индекса.

Анализ осуществляется с помощью микрометода культивирования лимфоцитов периферической крови человека и приготовления препаратов метафазных хромосом. Для анализа используется гепаринизированная кровь.

Среда «Лимфокар-2» представляет собой готовую к использованию бессывороточную среду, в состав которой входят все необходимые вещества для культивирования лимфоцитов цельной крови: смесь неорганических солей, аминокислот, витаминов, глюкозы, фенолового красного, антибиотиков, а также ФГА-П и др.

Наличие в среде фитогемагглютинина-П (ФГА-П) в оптимальной для лимфоцитов человека концентрации, обеспечивает митогенный эффект среды.

Остановка митотического деления с последующим накоплением метафазных пластин достигается инкубацией клеток с колхицином. В дальнейшем для проведения цитогенетического анализа клетки переводят в гипотонический раствор хлористого калия, фиксируют смесью метанола с ледяной уксусной кислотой. 

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ:

Перед непосредственным применением среду следует разморозить. Размораживание должно происходить естественным путём в холодильной камере при температуре от +2 до +8°С. Запрещена ускоренная разморозка среды и оттаивание при температуре 37°С. Рекомендуется избегать многократных циклов замораживания-оттаивания.

После размораживания и перемешивания среда представляет собой прозрачную жидкость красно-розового цвета.

1. Приступая к работе, содержимое каждого флакона аккуратно перемешать, путём бережного переворачивания флакона.
2. Вскрытие флакона и последующие манипуляции следует производить в асептических условиях.
3. Для культивирования 0,5 мл крови рекомендуется использовать 7 мл среды.
4. В стерильную ёмкость (флакон, пробирку и т.п.), вместимостью не менее 10 мл, в асептических условиях внести 7 мл среды.
   • Лимфокар-2 кат. №Н11 и №Н212 объёмом 60 и 100 мл необходимо перенести в стерильные ёмкости объёмом не менее 10 мл.
   • Лимфокар-2 кат. №Н10 выпускается в готовом для применения объёме 7 мл формате тест-флакона. Культивирование лимфоцитов производится непосредственно в тест-флаконе без переноса в другие ёмкости.
5. В ёмкость со средой внести 0,5 мл цельной гепаринизированной крови.
6. Стерильные ёмкости с тестируемыми образцами инкубировать в термостате при 37°С в течение 72 часов.
7. Растворить колхицин (0,1 мг/мл) в 5 мл дистиллированной воды. За 1,5 – 2 часа до окончания инкубации остановить деление клеток, путём добавления в каждую ёмкость   с культурой клеток (тест-флакон, пробирку) — по 50 мкл водного раствора колхицина.
8. Через 1,5–2 часа после добавления колхицина ёмкость встряхнуть, и перенести её содержимое  в центрифужную пробирку. Клетки осадить центрифугированием в течение 5-7 мин при 1000-1500 об/мин.
9. Приготовить гипотонический раствор хлористого калия (0,075 М), растворением 0,56 г KCl в 100 мл дистиллированной воды. Раствор подогреть до 37°С. 
10. После центрифугирования супернатант удалить, осадок разбить и в пробирку добавить 10 мл подогретого гипотонического раствора KCl. Хорошо перемешать осадок и поместить пробирку в термостат, инкубировать при 37°С в течение 10-12 мин.

11. Обработанные клетки осадить центрифугированием в течение 5-7 мин при 1000-1500 об/мин.

12. Супернатант  отобрать и удалить, оставляя 0,5-1,0 мл  надосадочной жидкости, и энергичным встряхиванием ресуспендировать клетки.
13. Далее проводится фиксация клеток свежеприготовленной смесью метанола и уксусной кислоты в соотношении 3:1. В пробирку, содержащую суспензию клеток добавить резкой струей фиксирующий раствор (2-3 мл), и довести объём в пробирке до 6-8 мл. Разбить осадок и поставить пробирку в холодильник  на 5—10 минут.
14. Обработанные фиксирующим раствором раствором клетки необходимо центрифугировать при 1000-1500  об/мин в течение 5-7 мин. Супернатант удалить, к осадку добавить 8-10 мл охлаждённого фиксирующего раствора. Разбить осадок. Далее выдержать при 4°С в течение 15-20 мин, поместив  в холодильник.
15. Обработанные фиксирующим раствором клетки центрифугировать при 1000-1500  об/мин в течение 5-7 мин. Супернатант удалить. Повторить фиксацию и обработку клеток свежеприготовленной смесью метанола и уксусной кислоты в соотношении 3:1 (в пробирку с суспензией клеток добавить фиксирующий раствор (2-3 мл), и довести объём в пробирке до 6-8 мл). Разбить осадок и поставить пробирку в холодильник до окрашивания тестируемых образцов.
16. Обработанные клетки осадить центрифугированием в течение 5-7 мин при 1000-1500 об/мин.  Супернатант удалить. Осадок ресуспендировать в 0,5-1,0 мл фиксирующего раствора и раскапать суспензию на охлажденные, смоченные водой предметные стёкла. Затем с целью фиксации стёкла быстро провести над пламенем горелки или высушить при комнатной температуре.
17. В заключении  препараты подвергают искусственному «старению» и окрашивают, используя краситель Гимза (или другой краситель, с аналогичными характеристиками) по общепринятой методике.

Данная Инструкция разработана на основе рекомендаций по приготовлению хромосомных препаратов (Методическое пособие для врачей «Цитогенетические методы диагностики хромосомных болезней», М. ,2009).

ФОРМА ВЫПУСКА: Препарат выпускают в пластиковых флаконах (ПЭТ-таре) по 7, 60 или 100 мл, которые герметично укупорены. Еврофлаконы имеют широкое, удобное для работы горло.

Срок годности: 2 года.

Срок годности изделия после первичного вскрытия флакона составляет  1 месяц  с даты вскрытия при температуре от +2 до +8°С.

Хранить в защищенном от света месте при температуре от -10 до -20°С.

Номер регистрационного удостоверения РФ

RU.77.99.88.003.Е.004577.03.15

Форма выпуска / дозировка

Таблетки массой 1000 мг

Состав

Экстракты: смолы коммифоры мукул, цветков баухинии пестрой, смолы мумие гималайского, листьев сферантуса индийского, МКЦ (Е460), порошок кожуры плодов индийского крыжовника (амала), порошок кожуры плода терминалии белерика, порошок кожуры плода миробалана хебула, порошок корневища имбиря аптечного, порошок плодов перца длинного, порошок семян перца черного, порошок красного перца Coralium rubrum, жемчужный кальций, порошок раковин жемчужной устрицы Mytilus margaritiferus, порошок раковин молюска Turbinella rara, порошок раковин молюска Cypraea moneta, порошок коры коричника цейлонского, порошок листьев корицы малобарской, порошок плодов кардамона черного.

Описание проверено

• Комкова Людмила Александровна
  (Провизор)
  
  Опыт работы: более 12 лет